脂肪酸检测
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时间：2024-07-24
源于：50
作者：ccpst
电话：400-9621-929
样品处理
1．移取果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准品，用纯水稀释，配制 成 50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1 µg/mL、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的标准溶液。
2．梨果实中可溶性糖的提取。
糖类色谱方法
色谱柱：Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm；
流动相：100%纯水洗脱
流速：1 mL/min； 柱温：85℃；
进样量：10 µL
糖类质谱方法
SCIEX Triple Quad™ 4500 质谱系统
扫描方式：MRM采集方式
离子源：APCI Negative
果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的结果与讨论
1、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的色谱条件的选择
本实验选择使用液相糖分析柱Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm， 1 mL/min 纯水流动相，对果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇四种 糖进行分离，其中果糖和葡萄糖为同分异构体，用该色谱柱 可以得到很好的分离，每种化合物的峰形都很对称，峰形较峰形较好。图 1 为 1ppm（μg/mL）果糖、葡萄糖、蔗糖 和山梨醇标准品的
实验中也测试了液质色谱柱Phenomenex Luna NH2，3 µm， 150×2 mm，该色谱柱也能得到较好的峰形，但整体灵敏度比HiPlex Ca糖柱低一半，图2为1 ppm（ng/mL）果糖、葡萄糖、蔗糖 和山梨醇标准品用Luna NH2柱测试的XIC提取离子流色谱图。如若 没有专门的糖柱也可以使用此款氨基柱做可溶性糖的分析。
2、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇质谱条件的选择
糖类化合物分子中只含有C、H、O原子，极性中等，适合用APCI源分析，而结构中含有-0H羟基，较容易失去H形成[M-H]脱氢离子，但糖类的热稳定性不好，高温下易分解和碳化，因此最终优化后的质谱条件加热温度为400℃。
3、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的样品提取条件的优化
本实验中样品提取过程基于以前使用液相检测时的灵敏度而开发，因此在用80%乙醇水对样品提取之后，通过旋转蒸发再用纯水复溶的过程将80%乙醇水溶剂替换成纯水。
而采用液质联用技术方法检测灵敏度比液相提高1000倍以上，样品浓度无需过高，因此在原有的提取步骤之后，只需用纯水将样品稀释10倍以上，过滤膜即可上机测试。既可以降低样品的基质效应，又大大缩短了样品前处理所需时间。
4、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的线性范围
用纯水逐级稀释果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准工作溶液至50ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1 μg/mL、5 ug/mL 和10 μg/mL，分别进样，以峰面积对浓度做标准曲线。图3、图4、图5、图6为四种糖的线性范围及线性相关系数R。
5、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的定量限
计算50 ng/mL 果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的信噪比。图7为每个化合物的信号和噪音的峰峰比计算值。
6、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的样品结果
实验中的砀山酥梨采集于南京农业大学江浦园艺实验站，经过特殊的栽培处理条件，采集处理后1h、5h、9h、13h、17h和21h(小时)6个时间点的样品，分别以S-1、5-2、S-3、S-4、S-5和S-6表示，每个样品平行处理2次，纯水稀释1000倍上机测试，取两次测试结果的平均值，得到样品中果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的含量结果，如表2。
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