服务介绍
传统检测单糖、双糖的分析方法有化学法、光谱法、GCMS、HPLC等方法。其中化学法无法准确测定单种糖的含量；光 谱法的工作繁琐、误差比较大；GC-MS方法需要进行衍生化反 应，前处理复杂，不利于快速分析；HPLC法虽然相比其他方法灵 敏度好、检测速度快、适用范围广，但也存在检出限较低、抗干 扰能力差，尤其对于食品中低浓度的单糖、双糖很难进行精确的 测定，无法满足
服务范围全国
检测周期5-7个工作日，可加急
相关资质可提供CMA、CNAS检测报告
服务模式快递寄样、现场取样、人工送样
服务对象企事业单位、高等院校、科研院所
服务方向采购销售、竞标投标、生产研发、科研数据、诊断优化、司法服务
检测标准国家标准、行业标准、企业标准、地方标准、国外标准、非标定制
服务内容
传统检测单糖、双糖的分析方法有化学法、光谱法、GCMS、HPLC等方法。其中化学法无法准确测定单种糖的含量；光谱法的工作繁琐、误差比较大；GC-MS方法需要进行衍生化反应，前处理复杂，不利于快速分析；HPLC法虽然相比其他方法灵 敏度好、检测速度快、适用范围广，但也存在检出限较低、抗干 扰能力差，尤其对于食品中低浓度的单糖、双糖很难进行精确的 测定，无法满足现阶段对食品检测快速、灵敏、准确的要求。LCMS/MS技术通过质谱的高选择性和高灵敏度能够降低目标物的检 出限、提高检测的重现性。 由于糖类为水溶性化合物，在常规的C18色谱柱上没有保留， 而采用其他填料的亲水色谱柱也很难得到太好的峰形或分离度。 因此，选取一款合适的分析糖的色谱柱是液质分析糖的实验关键点。目前专门测试糖的糖柱通常为液相柱，需要用到100%纯水相来作为流动相，并且流速通常高于1 mL/min，这样的色谱条件 对于大多数的质谱离子源来说都无法实现化合物的有效离子化， 或者只有通过分流才能实现，但是分流后将损失仪器的检测灵敏 度，失去了使用液质联用仪测试糖的提高灵敏度的目的。 SCIEX 的 LC-MS/MS液质联用系统的一大特点就是强大的 TurboV™离子源技术，离子源的加热能够达到750℃，ESI源耐受流速 范围 5 µL/min～3.0 mL/min，APCI源耐受流速范围50 µL/ min～3.0 mL/ min，因此可以直接使用HPLC糖柱在SCIEX液质联用仪上进行测试， 即实现了好的分离效果，又提高了检测灵敏度。本实验使用SCIEX Triple Quad™ 4500 质谱系统同时测定梨中的葡萄糖、果糖、蔗糖 和山梨醇四种糖, 实验方法简单、灵敏度高、选择性好。
实验思路
1. 配制果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准曲线，测试四种水溶性 糖的最低检出限；
2. 测试砀山酥梨果实中四种水溶性糖的含量，了解梨中四种糖的 比例关系。
样品处理
1．移取果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准品，用纯水稀释，配制 成 50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1 µg/mL、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的标准溶液。
2．梨果实中可溶性糖的提取。
梨果实中糖的提取
材料：砀山酥梨
将样品去皮削成小块，液氮速冻后储存于-80冰箱。称取2g样 品，加液氮研磨后，加入80%乙醇7 mL混匀。在37℃水浴中恒温 30 min，超声提取15 min，10000 r/min离心15 min。将上清液移 入25 mL容量瓶。重复提取3次，最后加入80%乙醇定容至25 mL。 取2 mL溶液旋转蒸发，用1 mL水溶解蒸干后的固体，溶解时用超 声波处理，尽量溶解完全。溶液离心后，用0.22 µm水系滤膜处 理，即可用于测定。
实验过程中发现此前处理过程提取出的糖样品在液质仪器上 的响应信号过高，最终样品又用纯水稀释10倍和1000倍分别上机 测试。
色谱方法
色谱柱：Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm；
流动相：100%纯水洗脱
流速：1 mL/min； 柱温：85℃；
进样量：10 µL
质谱方法
SCIEX Triple Quad™ 4500 质谱系统
扫描方式：MRM采集方式
离子源：APCI Negative
离子源参数
CUR：气帘气 25.00 psi
NC：离子化电流 -2.00 uA
TEM：加热温度 400.00 ℃
GS1：喷雾气 75psi
CAD：碰撞气 Medium
果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的结果与讨论
1、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的色谱条件的选择
本实验选择使用液相糖分析柱Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm， 1 mL/min 纯水流动相，对果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇四种 糖进行分离，其中果糖和葡萄糖为同分异构体，用该色谱柱 可以得到很好的分离，每种化合物的峰形都很对称，峰形较峰形较好。图 1 为 1ppm（μg/mL）果糖、葡萄糖、蔗糖 和山梨醇标准品的
实验中也测试了液质色谱柱Phenomenex Luna NH2，3 µm， 150×2 mm，该色谱柱也能得到较好的峰形，但整体灵敏度比HiPlex Ca糖柱低一半，图2为1 ppm（ng/mL）果糖、葡萄糖、蔗糖 和山梨醇标准品用Luna NH2柱测试的XIC提取离子流色谱图。如若 没有专门的糖柱也可以使用此款氨基柱做可溶性糖的分析。
2、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇质谱条件的选择
糖类化合物分子中只含有C、H、O原子，极性中等，适合用APCI源分析，而结构中含有-0H羟基，较容易失去H形成[M-H]脱氢离子，但糖类的热稳定性不好，高温下易分解和碳化，因此最终优化后的质谱条件加热温度为400℃。
3、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的样品提取条件的优化
本实验中样品提取过程基于以前使用液相检测时的灵敏度而开发，因此在用80%乙醇水对样品提取之后，通过旋转蒸发再用纯水复溶的过程将80%乙醇水溶剂替换成纯水。
而采用液质联用技术方法检测灵敏度比液相提高1000倍以上，样品浓度无需过高，因此在原有的提取步骤之后，只需用纯水将样品稀释10倍以上，过滤膜即可上机测试。既可以降低样品的基质效应，又大大缩短了样品前处理所需时间。
4、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的线性范围
用纯水逐级稀释果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准工作溶液至50ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1 μg/mL、5 ug/mL 和10 μg/mL，分别进样，以峰面积对浓度做标准曲线。图3、图4、图5、图6为四种糖的线性范围及线性相关系数R。
5、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的定量限
计算50 ng/mL 果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的信噪比。图7为每个化合物的信号和噪音的峰峰比计算值。
从信噪比计算值推测，果糖和葡萄糖的定量限为50 ng/mL;蔗糖定量限低于50 ng/mL，约为30 ng/mL;山梨醇定量限约为10 ng/mL.
6、果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的样品结果
实验中的砀山酥梨采集于南京农业大学江浦园艺实验站，经过特殊的栽培处理条件，采集处理后1h、5h、9h、13h、17h和21h(小时)6个时间点的样品，分别以S-1、5-2、S-3、S-4、S-5和S-6表示，每个样品平行处理2次，纯水稀释1000倍上机测试，取两次测试结果的平均值，得到样品中果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的含量结果，如表2。
从测试结果发现随着栽培处理时间的增长，梨样品中4种糖的含量也在逐渐增大，S-5样品即栽培处理经17小时梨样品中四种糖含量达到了最大值，到21小时梨中的含糖量开始下降。比较砀山酥梨S-5样品中四种糖的含量，发现山梨醇的含量最高，是果糖含量的2.5倍，是葡萄糖和蔗糖的约5倍。山梨醇甜度与葡萄糖相当，但能给人以浓厚感，在梨、桃、苹果中广泛分布，在人体内不转化为葡萄糖，不受胰岛素的控制，适合糖尿病人使用。
以S-5样品为例，按照前处理的称样量推算，假设一个砀山酥梨质量为500 g，去皮去核净重约400 g，那么吃一个梨摄入的糖量为果糖129、葡萄糖79、蔗糖79、山梨醇329。但如果以S-1样品为例，吃一个梨所摄入的糖量每种都不足S-5样品的十分之一。可见不同的栽培处理条件对于水果中糖分的积累影响非常之大。本实验样品与市售水果差异较大，实验结果仅供科研，不能作为日常饮食参考。
本实验通过SCIEX LC-MS/MS技术同时检测了果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇四种可溶性糖，实验中测试了不同的色谱柱对灵敏度的影响，最终选择了HPLC糖柱来分析。利用了SCIEX Turbo VTM离子源强大的耐高流速的特点，在SCIEXTriple Quadm 4500系统上直接使用了HPLC色谱条件，100%纯水1mUmin流速下做液质分析，依然得到了良好的检测灵敏度。方法的定量限s50ng/mL。
以砀山酥梨为样品进行了可溶性糖的提取前处理，用该液质方法进行糖含量检测，检测结果显示经过不同时间的栽培处理梨中糖分含量差异很大，以含糖量最高时的梨样品为例，推算出此时1个梨果实中约含果糖12g、葡萄糖79、蔗糖79、山梨醇32g。
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化妆品皮肤不良反应是指使用化妆品引起的皮肤、黏膜、附属器病变。以下是关于化妆品皮肤不良反应的诊疗指南的主要内容：
化妆品不良反应-病因
1. 化妆品成分中的刺激和致敏物质：化妆品皮肤不良反应最常见的是接触性皮炎，常由香料、防腐剂、乳化剂、抗氧化剂、防晒剂、植物添加剂等成分引起，最常见的是香料和防腐剂。此外，表面活性剂、颜料或染料（染发剂、指甲油等）、人造指甲材料及黏合剂等也是常见的刺激物。化妆品中的光敏性成分常引发光感性皮炎。
2. 局部皮肤屏障功能破坏：皮肤角质层细胞的致密结构与角蛋白、脂质紧密有序地排列，构成物理性屏障，以抵御外界各种物理、化学和生物性有害因素对皮肤的侵袭。皮肤屏障功能不完整或被破坏时，其对外用化学物质吸收增加，神经末梢受到的保护减少，经皮失水增加，是导致皮肤敏感的原因之一。
3. 非法添加违禁成分或限用成分浓度超标：少数不合格化妆品中非法添加违禁成分如糖皮质激素、抗生素和重金属，或限用成分如果酸浓度超标等。可引起糖皮质激素依赖性皮炎、重金属中毒，严重者出现系统损害等。
4. 其他：患者为自身敏感体质或患其他导致皮肤敏感的皮肤病，如玫瑰痤疮、特应性皮炎等；产品说明书不准确导致使用方法不当或未按说明书正确使用。
化妆品不良反应-发病机制
1. 刺激反应：由化妆品直接接触皮肤黏膜引起的损伤，是一种细胞毒反应。皮肤暴露于强刺激性化妆品后，受损皮肤失去完整性，表皮"砖墙结构"中双层脂质分子结构被破坏，经表皮失水增加，角质层水合程度下降，同时表皮中产生大量促炎因子。刺激性接触性皮炎无免疫记忆，参与反应的细胞包括CD4+ T细胞与Th1细胞。
2. 变态反应：化妆品皮肤不良反应多属于此类。系化妆品成分在接触部位启动的由细胞介导的超敏反应。化妆品成分多属半抗原，进入表皮后结合载体蛋白形成完全抗原，刺激角质形成细胞释放炎症细胞因子和趋化因子，激活朗格汉斯细胞、树突细胞以及内皮细胞。当皮肤再次接触此类化妆品成分时，抗原提呈细胞激活记忆T细胞，启动炎症反应。
3. 光敏反应：可分为光变态反应和光毒反应，以光变态反应为主，一般属于迟发型超敏反应，也有IgE介导的Ⅰ型速发型超敏反应。光能对完全抗原的形成起一定作用，可通过光化学途径改变化妆品半抗原结构，新生半抗原与蛋白结合形成新的完全抗原，诱导免疫反应发生。
4. 致痤疮样效应：矿物油刺激毛囊皮脂腺结构，引起毛囊口上皮细胞增殖与角化过度，使皮脂排出障碍；毛囊皮脂腺导管发生机械性阻塞，致毛囊阻塞、皮脂积聚而形成痤疮。
5. 致色素异常机制：化妆品成分可通过直接刺激、光敏反应等炎症反应刺激黑素细胞增殖和酪氨酸酶活性增高，引起皮肤色素沉着，或长期经皮吸收作用（某些染料、重金属等）导致局部皮肤色素增加。
化妆品不良反应-临床表现及分类
1. 接触性皮炎：包括非免疫性机制引起的刺激性接触性皮炎和免疫机制引起的变应性接触性皮炎。刺激性接触性皮炎为化妆品直接刺激造成的可见皮肤损害，初次使用化妆品后即可发生。变应性接触性皮炎是由于接触致敏物质引起的接触性皮炎，需一定致敏期才发生反应。
2. 光感性皮炎：由化妆品中某些成分与光线共同作用引起的光毒性或光变应性皮炎。有明确的化妆品接触史和光照史，皮损主要发生于使用化妆品后的光照部位。
3. 皮肤色素异常：接触化妆品的局部及邻近部位发生的慢性色素异常改变，或在化妆品接触性皮炎、光感性皮炎消退后局部遗留皮肤色素沉着、色素减退或色素脱失。
4. 唇炎：唇部使用化妆品后发生在唇红部位的接触性皮炎，表现为干燥、裂隙、鳞屑、肿胀，可有瘙痒感。
5. 痤疮：连续接触化妆品后，在接触部位发生的痤疮样毛囊皮脂腺炎症。发病前有明确的化妆品使用史。
6. 接触性荨麻疹：皮损主要发生在化妆品使用部位，表现为接触化妆品后数分钟至数小时内发生水肿性红斑和风团。
7. 毛发损害：有明确的发用化妆品使用史，如洗发护发剂、发乳、发胶、染发剂、烫发剂、生发水、纹饰材料等。使用后出现毛发变脆、分叉、断裂、脱落、失去光泽、变形等病变。
8. 甲损害：有明确的甲用化妆品使用史，在甲及甲周发生病变。表现为甲板变形，软化剥离，脆裂，失去光泽。
9. 其他皮肤不良反应：化妆品糖皮质激素依赖性皮炎是由于长期使用添加糖皮质激素的不合格产品，停用后出现皮肤刺痒、灼热不适及肿胀、红斑、鳞屑、丘疹、毛细血管扩张、痤疮加重等戒断症状。
化妆品不良反应-诊断与鉴别诊断
1. 诊断：各种化妆品皮肤不良反应均有化妆品使用史，停止使用可疑化妆品后症状消失或缓解，再次使用同类化妆品后症状可复发或加重，结合典型临床表现，可明确诊断。
2. 鉴别诊断：化妆品皮肤不良反应的诊断需排除其他原因所致的皮肤病变。化妆品接触性皮炎应与湿疹、脂溢性皮炎、糖皮质激素依赖性皮炎、光线性皮炎、多形性日光疹等疾病相鉴别。
化妆品不良反应-处理原则
1. 停用引起病变或可疑引起病变的化妆品，根据不良反应的类型对症治疗。
2. 化妆品接触性皮炎：可按接触性皮炎的治疗原则进行。以对症治疗为主，局部治疗可根据外用药使用原则进行选择。
3. 化妆品光感性皮炎：应尽量避免阳光和紫外线暴露。按照光毒性皮炎或光变应性皮炎的治疗原则对症治疗。
4. 化妆品皮肤色素异常：注意避免阳光和紫外线照射。可以按照一般色素沉着性皮肤病或色素脱失性皮肤病治疗。
5. 其他：化妆品接触性荨麻疹按荨麻疹的治疗原则对症治疗；化妆品痤疮按痤疮的治疗原则，如抗炎、抗菌和角质溶解等方法对症处理。
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