康派斯菌种鉴定服务内容

传统的生化方法对微生物进行准确的分类存在较大困难，随着分子生物学的发展，核酸测序已经应运到微生物菌种分析中，DNA测序方法由于不依赖菌种本身特点，对自然界所有菌种均可鉴定。康派斯提供的微生物鉴定服务包括细菌16srDNA鉴定和真菌ITS鉴定、真菌26srDNA鉴定（D1/D2区），通过PCR扩增16srDNA片段技术加以测序，通过得出的序列与GenBank或Eztaxon中已知序列进行比对即可，一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌（当然也有例外，DNA序列仅仅是一个参考指标）大部分菌种可以鉴定到种，康派斯提供的微生物鉴定服务通过菌种基因测序，分析菌种基因片段，判断菌种种是否含有抗药性基因，并且更加快速准确的得出鉴定结果。鉴定技术适用于99%以上微生物，鉴定成功率在98%以上。

检测样品

菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌、酵母菌、致病菌、沙门氏菌、单核增生李斯特氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、弯曲杆菌属、阪崎肠杆菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽孢杆菌、大肠埃希氏O157：H7/NM、致泻大肠埃希氏菌、溶藻弧菌、军团菌、乳酸菌、罐头食品的商业无菌、肠杆菌科、嗜渗酵母、粪链球菌、粪大肠菌群、肠杆菌属、厌氧菌落总数、厌氧亚硫酸盐还原菌、需氧嗜温菌芽孢、厌氧嗜温菌芽孢、嗜热嗜酸菌、嗜热菌落总数、白色念珠菌。

鉴定项目

鉴定方法

1. 常规鉴定
   常规鉴定内容有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。
2. BIOLOG碳源自动分析鉴定
   BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结果。该系统已获美国FDA认可，已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。康派斯检测机构拥有国内最全的BIOLOG数据库，涉及革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、厌氧菌、酵母、丝状真菌在内近2000种微生物。
3. 分子生物学鉴定
   应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是目前微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。康派斯检测拥有微生物菌种分类鉴定的分子生物学实验室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。目前可采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA（D1/D2）序列及丝状真菌的18S rDNA/ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。
4. API细菌数值鉴定系统
   API鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，目前已可鉴定超过600种的细菌。鉴定过程中，可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列，通过软件将待测细菌与数据库参比，得出鉴定结果。康派斯检测可应用API 50CH系列、API 20 E系列、API Staph系列对乳酸杆菌（Lactobacillus sp.）和相关细菌、芽孢杆菌（Bacillus sp.）、葡萄球菌属（Staphylococcus sp.）、微球菌属（Micrococcus sp.）和库克菌属（Locuria sp.）进行鉴定。
5. 功能性分析及功能基因
   工业微生物资源的功能及其功能基因研究，目前通过木聚糖酶、纤维素酶、葡萄糖异构酶、β-甘露聚糖酶等功能基因的克隆进行菌种产酶的功能性分析。应用gyrA、atpD及pheS等看家基因于微生物菌种鉴定，在某些种、亚种、株间有较好的分辨效果。
6. RAPD、SSCP技术
   随着微生物菌种应用的进一步发展，在食品安全管理、生物产品出口认证、知识产权保护等行业需求日益增加，微生物菌种株水平的鉴别技术成为一个迫切需要解决的问题。 采用随机扩增多态性DNA（Randomly amplified polymorphism DNA，RAPD）技术和单链构象多态性(Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP）技术对微生物菌株进行鉴别。如采用RAPD技术能够对同一菌种原始菌株与诱变菌株进行鉴别，对诱变菌株知识产权保护具有重要意义；采用SSCP技术进行工业酒精酵母菌株的鉴别，此技术结合菌株发酵特性，在酒类生产的质量控制方面起到积极作用。
7. TLC薄层层析
   TLC薄层层析技术应用于微生物菌种鉴定，进行细菌、放线菌细胞壁化学组分分析（氨基酸、糖），作为划分属特征的重要鉴定技术手段，起到了良好的辅助作用。
8. 全细胞脂肪酸分析鉴定系统
   采用Sherlock全自动细菌鉴定系统，通过对不同菌株的脂肪酸图谱进行分析，并与标准数据库进行比对，来鉴定细菌及酵母。该技术是细菌或酵母种水平鉴定的有效手段之一。
9. （G＋C）mol％及DNA/DNA杂交
   通过采用DU800核酸蛋白分析仪测定Tm值，从而得到微生物菌株的（G＋C）mol％，并与模式菌株进行DNA/DNA同源性分析，该鉴定技术手段是多相鉴定的重要组成部分。

服务说明

1. 样品形式可以是新鲜菌液、斜面培养基、平面培养基或者提取好的DNA。
2. 如果样品为基因组DNA，DNA：浓度>10ng/ul，总体积≥20ul，DNA无明显降解，革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚，最好提供基因组DNA。
3. 带有单菌落的平板或斜面：应长有至少分离三次以上的单菌落。
4. 鉴定结果一般可以鉴定到种。个别菌种由于微生物数据库相关数据缺乏，只能鉴定到属。如遇这种情况，正常收费。
5. 请提供至少纯化三次以上的菌株，由于菌种不纯会导致测序出现套峰，因此鉴定结果会有所误差。如遇这种情况，正常收费。
6. 我们不接受有致病性的样品，如果您的菌种带有致病性，请您提供基因组DNA，并将其进行加热处理以杀死致病菌。

交付结果

• PCR 电泳图产物照片；
• 菌种鉴定NCBI对比参考结果；
• 测序彩色波形图；
• 测序方向图；
• 序列碱基图。